激光共聚焦扫描显微镜以激光作为激发光源,采用光源针孔与检测孔共轭聚焦技术,每次只对空间上的一个点(焦点)进行成像,再通过计算机控制的一点一点的扫描形成标本的共焦图像。把X-Y平面(焦平面)扫描与Z轴(光轴)的扫描相结合,通过累加连续层次的二维图像,经过专门的计算机软件处理,可以获得样本的三维图像。在此过程中,来自焦点以外的光信号不会对图像形成干扰,从而大大提高了显微图像的清晰度和细节分辨能力。
激光共聚焦扫描显微镜既可以用于观察细胞形态,也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计以及细胞形态的测量, 配合焦点稳定系统可以实现长时间活细胞动态观察。
1、细胞/细菌/污泥类样本
①细胞: 冻存的细胞;25平方厘米培养瓶长到70%加满培养基室温固定好寄送
②细菌:菌液5000 rpm离心10 min,于1.5 mL离心管中得到绿豆大小沉淀,寄送沉淀。细菌类需要死活染色/ROS染色的,一般加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触。
③蛋白/多糖类:样本加冰袋泡沫盒4度保存或者2.5%的戊二醛固定4度保存,样品不和冰袋接触。
④污泥类:样本如果太厚,可以进行冷冻切片,具体请和工作人员沟通。
2、植物类样本
① 直接拍摄:样品长宽不超过20mm,高不超过10mm;或直径不超过10mm,厚度不超过5mm,一定标出测试面。一般加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触。
②制样后拍摄:可进行简单冰切及刀切,软化等。样本准备好后加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触。
3、生物膜类样本
①金属/瓷砖/岩石等块体类:建议长宽高尺寸不超过1 cm,且均要求样品表面平整,需要标出拍摄面(测试面起伏<200um);
②薄膜类:直径尺寸不超过2 cm,一般加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触;
③若在爬片上培养生物膜,可将爬片粘于培养皿底部,充满培养基,将封口膜密封完全,再4℃保存。
4、提供清楚激发/发射波长,拍摄倍数等要求信息;若需要染色,需要注明染色剂种类,标明染料名称和拍摄条件(激发/发射波长)
备注:若做细胞摄取实验或其他亚细胞器的定位实验时,要求样品自带荧光。
5、细胞类样品直接拍摄,需要封片后常温避光邮寄。
6、固体类直接拍摄样品建议长宽不超过20mm,厚度不超过10mm,重量不超过10g,一定标出测试面。
服务周期:
一般为样品接收后的1-2周,具体实验周期及送样时间请与前期对接工作人员沟通确认,谢谢!
交付内容:
2D模式每样拍摄3个视野,交付6张照片,3D模式每样拍摄1个视野,交付1张照片。结果反馈请在测试完成一周内,不建议回收样品,如有需要请提前反馈给工作人员。
1、激光共聚焦拍照和普通荧光显微镜拍照有什么不同?
荧光显微镜使用的光源比激光共聚焦通能低,以短波长的紫外光为主,激光共聚焦光源主要是激光,分辨率高,可以逐点扫描,可以做三维重构,适合多重染色的样品观察。
2、激光共聚焦荧光通道的颜色是实际颜色吗?
不是,是伪彩色,光电倍增管只检测强度信息,不检测颜色信息。颜色可以进行更改。不过可通过发射波长的范围,判断大概是什么颜色。
3、目前平台共聚焦有哪些激光器配置?
有405nm,488nm,552nm,555nm,559nm,635nm、650nm
4、蛋白和脂性组份一般用什么染料染?
可以用FITC和尼罗红染色,区分蛋白和脂性组份。