qPCR检测

 

1.简介
    在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。分为SYBRGreen法与TaqMan探针法。
    荧光染料法：实验设计简单（仅需2个引物，无需设计探针），初始成本低，灵敏度高，但需要进行熔解曲线分析检验扩增反应的特异性。适用于非特异性检测（专一性要求不高或高通量检测）。
    探针法：有高特异性（引物和探针共同于模板结合），高信噪比，能进行多重反应。但成本高，实验设计繁琐。适用于扩增序列专一检测。
2.服务流程

 

1. 送样要求
（1）A：细胞、细菌、真菌、动植物组织等均可寄送，为了保证实验要求，样品数尽可能准备充足。

          注意事项
          1. 组织在1-2min内完成取材，速冻，并立即放入-80℃或液氮中保存。
          2. 有条件的话，最好先将样本在液氮中速冻，再转入-80℃冰箱中保存。
          3. 使用的冻存管最好也用DEPC处理。
          4. 对于组织及细胞样本，如果没有液氮或-80℃冰箱，也可用RNAlater保存，但是组织一定要切成比较小的块状，-20℃保存运输。
      B：细胞沉淀：细胞量大于10^6的细胞/组；细菌沉淀：细菌量大于10^8的细菌/组；
      C：土壤、污泥样本：至少10g；
      D：环境水样：至少1L/组，寄送装有过滤定量水样的滤膜（4°C），干燥寄送。 如果其他样品寄送需求，请与工作人员沟通确认！
（2）待测样品为RNA样品及cDNA样本，RNA浓度不低于200ng/uL，DNA浓度不低于20ng/uL，核酸体积10uL/检测基因，且样品接收后需先进行质检，质检合格的开展后续项目（核酸样本需包装完整，离心管用封口膜封闭，干冰寄送）。
（3）不接受具有致病性的样品。
（4）待测样品（原始样品或者RNA或者cDNA，原始样品可由我们代处理，RNA样品及cDNA样本接收后需先进行质检，质检合格的开展后续项目）;
（5）提供所需的引物/标准品（或平台代设计及合成）；提供检测基因的序列和引物序列，若基因序列来自文献等其他途径，可以多参考几组，避免引物特异性不足，延长实验周期。
（6）其他所涉及的细胞、试剂盒以及生物耗材等平台都可以有偿提供。