分子互作检测是在分子生物学、生物化学以及药理学等领域中至关重要的技术,用于研究生物分子之间(如蛋白质、DNA、RNA、抗体、小分子配体等)的相互作用。这些相互作用对于理解生物过程、疾病机制、药物发现和开发等方面至关重要。
分子互作检测技术种类繁多,每种技术都有其特定的应用场景和优缺点。以下是一些常见的分子互作检测技术:
表面等离子共振(SPR)
这是检测生物分子相互作用的“金标准”,无需标记,实时监测,高灵敏度。SPR通过监测光在金属表面反射时产生的等离子共振现象的变化来检测分子结合事件。
Biacore分子互作系统
Biacore是SPR技术的一种商业化应用,广泛用于药物筛选和动力学分析。
生物膜干涉技术(BLI)
BLI通过测量生物膜的光学厚度变化来检测分子间的相互作用。
微量热泳动(MST)
MST利用激光诱导的温度梯度导致的分子迁移率变化来研究分子间相互作用。
等温滴定量热(ITC)
ITC直接测量结合过程中释放或吸收的热量,提供动力学和热力学参数。
荧光能量共振转移(FRET)
FRET基于供体和受体荧光团之间的距离依赖性能量转移,用于检测分子接近程度。
荧光偏振(FP)
FP通过测量分子旋转引起的偏振光变化来检测结合事件。
时间分辨荧光(TRF)
TRF利用镧系元素标记的长寿命荧光,减少背景信号,提高检测灵敏度。
Western Blot
Western Blot是一种定性和半定量蛋白质的技术,可以通过抗体检测特定蛋白质的存在。
拉下实验(Pull-down)
拉下实验通常使用固定在固相载体上的亲和标签或抗体来捕获目标蛋白,并鉴定其互作伙伴。
免疫共沉淀(Co-IP)
Co-IP利用抗体从细胞裂解液中沉淀出目标蛋白及其互作蛋白,用于研究蛋白质-蛋白质互作。
酶联免疫吸附实验(ELISA)
ELISA是一种基于抗体的检测方法,可用于检测和量化特定抗原或抗体的存在。
细胞原位生物大分子互作检测
如Attana Cell 200,可在细胞层面上进行实时原位分子结合动力学检测。
选择哪种技术取决于具体的实验需求,如样品类型、需要的信息(如亲和力、动力学参数)、成本和实验室资源等。在实际应用中,e测试研究人员可能会结合使用几种不同的技术,以获得最全面的数据集。