细胞黏附性是维持组织结构稳定的基本条件,也是细胞运动和发挥功能的调节因素,并且对细胞的增殖、分化有重要影响。通常可分为两类,即细胞与细胞黏附和细胞与基质黏附。机体内许多细胞,如上皮细胞,需要牢固地定在某处发挥功能;另一些细胞,如白细胞,活跃运动,就需要不断调节细胞黏附。细胞黏附性的改变在肿瘤转移过程中也发挥着重要作用。体外测定细胞粘附性实验方法的建立,为粘附分子的发现、细胞间粘附影响的研究提供了极为有效的方法。
细胞粘附实验步骤
1. 用无血清培养基RPMI-1640将Matrigel(人工基底膜胶)配制成0.04μg/μl的人工基底膜胶备用,96孔板每孔中铺Matrigel
2μg,放于超净台中风干过夜。
2. 在96孔板加入适量无血清RPMI-1640细胞培养液(或PBS或生理盐水),放置60-90分钟。
3. 洗去多余的胶,取培养的肿瘤细胞以1×104/孔接种在铺胶的96孔板中,设3个重复孔,放入37摄氏度5%CO2培养箱中培养24h。
4. 加药和模型药,培养48h。
5. MTT检测:吸掉液体,然后每孔加入MTT
10μL,继续培养4h,吸掉液体,每孔加入二甲基亚砜(DMSO)100μl,在振荡器上振荡5-10分钟,在显微镜下观察无晶体,然后在酶标仪490nm波长读取数值。
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