原位杂交(In Situ Hybridization,
ISH)是一种分子生物学技术,用于定位特定的核酸序列(DNA或RNA)在细胞或组织中的位置。通过将标记的单链核酸探针与目标核酸序列杂交,可以检测特定基因的表达模式或病毒DNA的存在。这种方法广泛应用于基础研究、临床诊断和药物开发等多个领域。
原位杂交的基本步骤包括:
样本准备:获取组织或细胞样本,并通过固定、脱水等步骤处理。
预杂交:对样本进行预处理,以减少背景信号并提高杂交效率。
杂交:将标记的探针与样本在适宜条件下进行杂交。
洗涤:去除未结合的探针,保留杂交复合物。
信号检测:通过放射自显影或酶促反应(如显色或荧光)来检测信号。
观察与分析:使用光学显微镜或电子显微镜观察样本,并分析结果。