单克隆抗体制备的基本步骤概述

　　单克隆抗体制备是一个复杂的过程，涉及多个步骤。以下是单克隆抗体制备的基本步骤概述：

　　抗原提纯与动物免疫

　　选择并纯化所需的抗原。

　　使用弗氏完全佐剂(CFA)进行初次免疫，之后使用弗氏不完全佐剂(IFA)进行加强免疫。

　　免疫小鼠(通常为BALB/c小鼠)，监测抗体水平。

　　骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备

　　选择合适的骨髓瘤细胞系(如Sp2/0细胞株)，该细胞系应不分泌免疫球蛋白。

　　准备处于对数生长期的骨髓瘤细胞，以确保细胞活性。

　　细胞融合

　　从免疫后的小鼠脾脏中分离B淋巴细胞。

　　使用化学试剂聚乙二醇(PEG)促进B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合。

　　筛选出杂交瘤细胞，这些细胞同时具备骨髓瘤细胞的无限增殖能力和B细胞产生抗体的能力。

　　筛选阳性杂交瘤细胞

　　在含有次黄嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶核苷(HAT)的选择性培养基中培养融合细胞，只有杂交瘤细胞能在这种培养基中存活。

　　通过有限稀释法将杂交瘤细胞克隆化，确保每个孔中只有一个细胞。

　　使用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各克隆产生的抗体，并选择那些产生特异性抗体的克隆进行进一步培养。

　　单克隆抗体的制备

　　对选定的杂交瘤细胞进行大规模培养，或者将其接种到小鼠腹腔中诱导腹水形成，从中提取抗体。

　　从细胞培养上清或腹水中纯化单克隆抗体。

　　抗体的鉴定与表征

　　确定抗体的特异性、亲和力和其他特性。

　　对最终产品进行质量控制测试。

　　抗体的保存

　　将单克隆抗体冻存以供将来使用。