Masson三色染色法是一种经典的组织学染色技术,主要用于显示组织中的胶原纤维、肌肉纤维和细胞核等结构。在皮肤组织学研究中,Masson染色特别适用于观察胶原纤维的分布和排列情况,这对于评估皮肤的结构完整性、伤口愈合过程以及皮肤病的研究都非常有用。
下面是进行小鼠皮肤组织的Masson三色染色的一般步骤:
准备工作
组织固定:采集小鼠皮肤样本后立即放入10%中性甲醛溶液中固定至少24小时。
脱水和透明:固定后的组织经过一系列酒精梯度(70%、80%、90%、100%)进行脱水,然后用二甲苯进行透明处理。
包埋:将透明后的组织块包埋在石蜡中,制作成石蜡块。
切片:使用轮转式切片机将石蜡块切成4-6微米厚的连续切片,并将其贴附在载玻片上。
Masson三色染色步骤
脱蜡:将切片置于二甲苯中脱蜡3次,每次5分钟,然后依次通过100%、90%、70%酒精进行再水化。
核固红染色:将切片置于0.1%核固红(Weigert's Iron Hematoxylin)染色液中染色10分钟,然后用水冲洗。
分化:用1%醋酸溶液分化30秒至1分钟,直到背景变为淡黄色。
Biebrich Scarlet-Acid Fuchsin染色:将切片置于Biebrich Scarlet-Acid
Fuchsin染色液中染色10分钟,此步骤用于染色肌肉纤维和胶原纤维。
磷钼酸分化:用1%磷钼酸溶液分化3-5分钟,直到背景变得清澈。
Phosphomolybdic Acid染色:将切片置于0.5% Phosphomolybdic
Acid溶液中染色10分钟,这一步骤用于进一步增强胶原纤维的颜色。
Aniline Blue染色:将切片置于1% Aniline Blue溶液中染色5分钟,用于染色胶原纤维。
脱水和封片:依次通过70%、90%、100%酒精脱水,最后用二甲苯透明,滴加中性树胶封片。