tunel染色的操作步骤

　　TUNEL染色是一种用于检测细胞凋亡的技术，全称为“脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法”(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase Mediated dUTP Nick End Labeling)。这项技术基于细胞凋亡过程中DNA的断裂，产生大量的3'-OH末端。通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用，可以将荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素标记的脱氧核糖核苷酸标记到这些3'-OH末端上，从而实现对凋亡细胞的可视化检测。

　　TUNEL染色的操作步骤

　　样本制备：如果是组织样本，通常需要制作成石蜡切片或冷冻切片。

　　脱蜡和水化：如果是石蜡切片，需要用二甲苯脱蜡并经过不同浓度的乙醇进行水化。

　　洗涤：用PBS(磷酸盐缓冲液)洗涤数次，去除残留的有机溶剂。

　　蛋白酶K处理：使用蛋白酶K处理样本，帮助TdT更好地接近DNA末端。

　　洗涤：再次用PBS洗涤去除多余的蛋白酶K。

　　TUNEL反应：加入含有TdT和荧光素标记dUTP的混合物，让其与DNA的3'-OH末端反应。

　　封固：用适当的封固剂封固样本。

　　检测：使用荧光显微镜观察并拍照记录。